Barvení (biologie)

Plicní tkáň pacienta s emphysemou barveno hematoxylinem a eosinem.

Barvení je biochemická metoda, kterou se přidá k substrátu specifická barvící látka (barvivo) a slouží v biologii na prokázání výskytu (kvalifikaci) nebo množství (kvantifikaci) specifické látky ve zkoumané tkáni nebo v pletivu, nebo k obarvení celých struktur a objektů, které zlepšuje nebo umožňuje jejich pozorování optickým mikroskopem.

Užívaná barviva

abecedně: * bismarckova hněď * karmín - barví jádra červeně, extrakt ze samiček červce nopálového (Coccus cacti), nepřebarvuje, dříve využíván v embryologických studiích pro barvení celých bloků tkání. * Coomassie * DAPI * eosin * Erie garnet = direct red 10 * etidium bromid * fenolová červeň * hematoxylin * Hoechstovo barvivo * jód * jádrová červeň „Kerlechtrot“ - barví jádra červeně, v roztoku síranu hlinitého * Kongo červeň = Congo red = direct red 28 - barví amyloid červeně * krystalová violeť * kyselina pikrová (2,4,6-trinitrofenol) - barví cytoplazmu buněk a svaly žlutě * kyselý fuchsin - kolagenní vlákna červeně * Luciferová žluť - fluorescenční barvivo * malachitová zeleň * methylová zeleň * methylová modř * neutrální červeň * nilská modř * nilská červeň = Nile blue oxazone - barví tukové kapénky červeně * olejová červeň = oil red O - barví tuk červeně * rhodamin * safranin * saturnová červeň (sirius red F3B, direct red 80, F3B 200, C. +more I. No. 35780, CAS No. 2610-10-8) - azobarvivo, kolagenní vlákna barví červeně, případně barvení amyloidu * irius red 4B = direct red 79 = L4B 200 - azobarvivo * šafrán - barví kolagen, extrakt z blizen šafránu setého * Weigertův železitý hematoxylin = Weigert's Iron Hematoxylin - barví chromatin v jádrech šedě nebo temně hnědě (modročerně až hnědočerně).

Barvicí metody

Existuje mnoho detailně rozpracovaných barvících metod, z nejvýznamnějších je možné uvést:

Barvení mukopolysacharidů

Mukopolysacharidy se barví směsí PAS, alciánové modři a hematoxylinu, a to tímto postupem:

# odparafínování: xylen 1 (5 min. ), xylen 2 (5 min. +more), alkohol 1 (5 min. ), alkohol 2 (5 min. ), oplach v destilce # kyselina jodistá 0,5 % 5 minut # praní vodou 2-3 min, oplach destilovanou vodou # Schiffovo reagens 20-30 min # tekoucí voda 10 min. , oplach destilovanou vodou # alciánová modř (před použitím se doporučuje přefiltrovat) 1-2 hod. # oplach vodou # hematoxylin 5 min. # praní 20 min. , oplach destilovanou vodou, oplach absolutním alkoholem, xylen 3 (5 min. ), xylen 4 (5 min. ), montování.

Výsledek: * neutrální mukopolysacharidy a glykogen - červeně * kyselé mukopolysacharidy - modrozeleně * jádra - modře hematoxylinem

Barvení kolagenních vláken

Kolagenní vlákna je možné barvit za použití saturnové červeni a Weigertova železitého hematoxylinu:

# odparafínování: xylen 1 (5 min. ), xylen 2 (5 min. +more), alkohol 1 (5 min. ), alkohol 2 (5 min. ) # důkladně proprat ve vodě # Weigertův železitý hematoxylin (roztok A + roztok B 1 : 1) 5 min. nebo gallocyanin 24 hod. # praní v tekoucí vodě 5-10 min. # saturnová červeň 1-20 min. (10 ml 1 % roztoku saturnové červeně + 90 ml nasyceného roztoku kys. pikrové) # několikrát oplach v absolutním alkoholu, xylen 3, xylen 4, montování.

Výsledek: * kolagenní vlákna - červeně * svalovina - žlutě (pouze pokud je v saturnové červeni také kyselina pikrová) * jádra - hematoxylinem

Barvení elastických vláken

(orcein + hematoxylin)

# odparafínování: xylen 1 (5 min. ), xylen 2 (5 min. +more), alkohol 1 (5 min. ), alkohol 2 (5 min. ), oplach v destilované vodě # orcein 6-8 hod. při teplotě 38-40 °C # oplach destilovanou vodou # oplach kyselým alkoholem 70 % # praní ve vodě # hematoxylin 5 min. # praní 20 min. , oplach destilovanou vodou, oplach absolutním alkoholem, xylen 3, xylen 4, montování.

Výsledek: * elastická vlákna - červenohnědě (elastické vazivo (žluté vazy obratlů, vazy hrtanu), elastická chrupavka (ušní boltec, epiglottis))

Giemsovo barvení

Gramovo barvení

Základní barvící metoda v mikrobiologii. Barvíme fixovaný preparát.

# krystalová violeť na 20s - oplach ve vodě # Lugolův roztok na 20s - oplach ve vodě # aceton - odbarvení (dokud odtéká barva z preparátu) # Karbolfuchsin na 20s - oplach ve vodě.

Externí odkazy

Metody: * [url=http://www. lf3. +morecuni. cz/histologie/doc/Skripta_01. pdf]Metody histologického studia[/url] (PDF dokument) * [url=http://www. sweb. cz/zdl3/hht1. doc]Odběr materiálu pro histologické vyšetření[/url] (textový dokument DOC) Barviva: * [url=https://web. archive. org/web/20130531221415/http://stainsfile. info/StainsFile/jindex. html]přehled barviv[/url] (anglicky).

Kategorie:Barvicí metody