Cesko.wiki Hyperspektrální cytometrie
Author
Albert FloresPrůtokový cytometr Dichroické zrcátko Hyperspektrální cytometrie je velmi účinný cytometrický nástroj, díky kterému je možné zkoumat velké množství biologických částic v jednom časovém úseku (řádově několik tisíc). V současnosti je možné zkoumat okolo 8-15 parametrů a pozorované částice lze zkoumat živé.
Princip
Principem hyperspektrální cytometrie je excitace fluoroforů (organické barvy, nanočástice, fluorescenční bílkoviny) vázaných na biologické částice. Následně emitovaný paprsek světla je rozložen na celé spektrum. +more Jednotlivé části spektra jsou poté usměrněny soustavou zrcadel filtrů a detektorů. Hlavním rozdílem od běžných cytometrů je rozklad zkoumaného paprsku na jednotlivé části spektra. To umožňuje jednodušší a kvalitnější sběr více parametrů. Soubor těchto parametrů charakterizuje jednotlivou částici. Udává její tzv. footprint (otisk).
K excitaci se využívá svazek jednoho anebo více laserů. Biologické částice jsou seřazeny jedna po druhé v kapiláře pomocí proudu vody. +more Procházejí postupně paprskem laseru při excitačním času okolo 1-10 µs. Emitované spektrum se pohybuje v rozmezí 350-800 nm. Emitované světlo a světlo odražené je rozděleno soustavou dichroických zrcadel a band-pass filtrů (pásmová propust). Problémem může být, že část světla bývá na těchto filtrech a zrcadlech pohlcena. Tento problém se řeší vhodným nastavením úhlů těchto zrcadel filtrů. Nejprve bývají odkloněny části spektra o větší vlnové délce, kvůli daleko větší energii. K vedení jednotlivých paprsků se využívá optických kabelů. Výsledné vyfiltrované paprsky jsou sbírány fotonásobiči a následně ukládány k další analýze. Pro Forward Scatter a SideScatter se užívá fotodiod a pro fluorescenční emisi fotonásobičů.
Využití
Hyperspektrální cytometrie se využívá v genetice, imunologii, mikrobiologii, diagnostické medicíně, molekulární biologii a dalších přírodních vědách.
