Array ( [0] => 15510125 [id] => 15510125 [1] => cswiki [site] => cswiki [2] => ELISA [uri] => ELISA [3] => ELISA diagram.png [img] => ELISA diagram.png [4] => [day_avg] => [5] => [day_diff] => [6] => [day_last] => [7] => [day_prev_last] => [8] => [oai] => [9] => [is_good] => [10] => [object_type] => [11] => 1 [has_content] => 1 [12] => [oai_cs_optimisticky] => ) Array ( [0] => {{Různé významy|tento=imunologické metodě|druhý=připravovaném detektoru gravitačních vln se zkratkou eLISA|stránka=Evolved Laser Interferometer Space Antenna}} [1] => '''ELISA''' (z angl. '''E'''nzyme-'''L'''inked '''I'''mmuno'''S'''orbent '''A'''ssay), někdy také označovaná jako EIA ('''E'''nzyme '''I'''mmuno'''a'''ssay) je jednou z nejpoužívanějších imunologických metod sloužících k detekci a stanovení koncentrace [[antigen]]ů nebo [[Protilátka|protilátek]]. Principem metody je imunoenzymatické reakce bezbarvého (chromogenního) substrátu, který je hydrolyzován v barevný produkt a lze měřit [[Spektrofotometrie|spektrofotometricky]]. Intenzita zabarvení koreluje s koncentrací detekovaného antigenu nebo protilátky. ELISA využívá dvou základních vlastností [[imunoglobulin]]ů. Za prvé schopnosti vázat se na povrch plastů (např. [[polystyren]]u), za druhé schopnosti vázat [[enzym]]y na Fc fragmenty (viz [[protilátka]]) imunoglobulinových molekul. [2] => [3] => == Základní složky testu ELISA == [4] => [[Soubor:ELISA.jpg|200px|náhled|Klasická 96jamková destička pro metodu ELISA]] [5] => [6] => # '''Antigen''' [7] => #* detekovaný v testovaném vzorku [8] => #* známý, komerčně připravovaný [9] => # '''Protilátka''' [10] => #* detekovaná v testovaném séru [11] => #* známá, komerčně připravovaná [12] => # '''Konjugát''' [13] => #* jedná se opět o protilátku proti protilátce (konkrétně proti druhově specifickým imunoglobulinům příslušného [[izotyp]]u (proti [[Imunoglobulin G|IgG]], [[Imunoglobulin M|IgM]], [[Imunoglobulin A|IgA]], viz [[protilátka]]), na kterou je navázaný enzym (konjugovaná enzymem) [14] => # '''Substrát''' [15] => #* je chemická látka, která reaguje s enzymem, a tím změní svou barvu [16] => [17] => '''Pro imunoenzymatickou reakci jsou používány různé typy enzymů a substrátů (enzym/substrát):''' [18] => [19] => Alkalická fosfatáza (AP) / paranitrofenyl fosfát (PNPP), žlutý produkt rozpustný ve vodě, absorbuje světlo o vlnové délce 405 [[Metr#Násobky a díly|nanometru]] (nm). [20] => [21] => Křenová peroxidáza (HRP) / 2,2'-Azinobis [3-ethylbenzothiazoline-6- kyselina sulfonová]-diammoniová sůl (ABTS) zelený produkt, absorbuje světlo o vlnové délce 410 a 650 nm, ortho-fenyldiamin dihydrochloride (OPD) ve vodě rozpustný žluto-oranžový produkt, vlnová délka 492 nm, 3,3',5,5'-tetramethylbenzidin (TMB) modrý produkt, po přidání kyseliny sírové nebo fosforečné přeměna na žlutý produkt, absorbance 450 nm. [22] => [23] => Beta galaktosidáza (β-Gal){{Citace elektronického periodika [24] => | titul = β-Gal ELISA 11539426001 [25] => | periodikum = Sigma-Aldrich [26] => | url = https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/11539426001?lang=en®ion=CZ [27] => | datum vydání = ©2018 [28] => | datum přístupu = 2018-04-11 [29] => }} / o-nitrofenol-β-D-galactopyranosid (ONPG),{{Citace elektronického periodika [30] => | titul = ONPG (o-nitrophenyl--D-galactopyranoside) - Thermo Fisher Scientific [31] => | periodikum = www.thermofisher.com [32] => | datum vydání = ©2006–2018 [33] => | url = https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/34055 [34] => | jazyk = en-US [35] => | datum přístupu = 2018-04-11 [36] => }} Naftol-AS-Bl-beta-D-galactopyranosid (Nap-Gal), and 4-Methyl-umbelliferyl-beta-D-galactopyranosid (MUm-Gal), chlorfenolová červeň β-D-galactopyranosid (CPRG). [37] => [38] => == Způsoby detekce antigenu == [39] => Používají se tyto čtyři detekce:{{Citace periodika [40] => | příjmení = Bio-Rad [41] => | titul = Types of ELISA [42] => | periodikum = Bio-Rad [43] => | jazyk = en [44] => | url = https://www.bio-rad-antibodies.com/elisa-types-direct-indirect-sandwich-competition-elisa-formats.html [45] => | datum vydání = [©2015] [46] => | datum přístupu = 2018-04-11 [47] => }} [48] => [49] => * '''Přímá ELISA''' [50] => [51] => Primární protilátky jsou přímo konjugované s enzymem. [52] => [53] => * '''Nepřímá ELISA''' [54] => [55] => # Primární protilátky jsou konjugované s biotinem (následuje přidání streptavidinu konjugovaného s enzymem). [56] => # Na antigen se vážou neznačené primární protilátky, na které se následně vážou sekundární protilátky konjugované s enzymem nebo biotinem. [57] => [58] => * '''Sendvičová ELISA''' [59] => [60] => Dno jamky 96jamkové destičky je potažené protilátkami, které vážou antigen. Na antigen se vážou i detekční protilátky. Může se jednat o ELISA přímou i nepřímou. [61] => [62] => * '''Kompetitivní ELISA''' [63] => [64] => Primární protilátka je inkubována s antigenem. V reakci vznikají komplexy antigenu s protilátkou. Čím více antigenu je ve vzorku, tím méně volných protilátek zůstane. Tato suspenze je poté přidána do jamky s imobilizovaným antigenem. Volné primární protilátky se vážou na imobilizovaný antigen a jsou detekovány enzymaticky značenými sekundárními protilátkami. Nakonec je přidán chromogenní substrát. Koncentrace antigenu je nepřímo úměrná intenzitě signálu.{{Citace periodika [65] => | příjmení = Bio-Rad [66] => | titul = ELISA Protocols (All Types) {{!}} Bio-Rad [67] => | periodikum = Bio-Rad [68] => | jazyk = en [69] => | url = https://www.bio-rad-antibodies.com/elisa-protocol-antigen-capture-elisa-protocols-pk-ada-bridging.html [70] => | datum vydání = [©2015] [71] => | datum přístupu = 2018-04-11 [72] => }} [73] => [74] => == Praktické použití == [75] => Metody ELISA se využívají k diagnostice infekčních nemocí člověka a zvířat. Stanovují se buď protilátky proti konkrétnímu patogenu, nebo se detekují přímo [[prion]]ové, [[virus|virové]], [[bakterie|bakteriální]], [[Parazitismus|parazitární]] antigeny. Antigen lze detekovat v séru, tkáních a tkáňových tekutinách (např. mozkomíšní mok), trusu (stolici), slinách atd. Detekce patogenů v trusu se označuje jako „koproantigen ELISA“. Dále se ELISA používá k detekci některých [[toxin]]ů, [[hormon]]ů, celé řady [[Bílkovina|proteinů]], případně dalších bioaktivních látek. Vědci pracují i na vývoji metod ELISA pro kosmický výzkum, například k detekci forem života na [[Mars (planeta)|Mars]]u. [76] => [77] => == Modifikace testu ELISA == [78] => * FLISA{{Citace periodika [79] => | příjmení = Magnusson [80] => | jméno = Karl-Eric [81] => | titul = Fluorescence-Linked Immunosorbent Assay (FLISA) for Quantification of Antibodies to Food Antigens [82] => | periodikum = A Journal of Molecular and Cellular Immunology [83] => | datum = 1987 [84] => | ročník = 16 [85] => | číslo = 3 [86] => | strany = [87] => | url = https://doi.org/10.3109/08820138709030578 [88] => }} [89] => * RIA [90] => [91] => == Odkazy == [92] => === Reference === [93] => [94] => [95] => === Literatura === [96] => * TIJSSEN, P. ''Practice and Theory of Enzyme Immunoassays.'' 8. Print ed. Amsterdam: Elsevier, 1993. 549 s. Lit. na s. 505–540. ISBN 978-0-444-80633-8. Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology, 15. [97] => * TIZARD, Ian R. ''Veterinary Immunology.'' 10th ed. St. Louis (Missouri): Elsevier, 2018. 539 s. ISBN 978-0-323-52349-3. [98] => * TOMAN, Miroslav a kol. ''Veterinární imunologie.'' 2., dopl. a aktualiz. vyd. Praha: Grada, 2009. 392 s. ISBN 978-80-247-2464-5. [99] => [100] => === Související články === [101] => * [[Western blot]] [102] => [103] => === Externí odkazy === [104] => * {{Commonscat}} [105] => [106] => {{Autoritní data}} [107] => [108] => [[Kategorie:Imunologické metody]] [] => )
good wiki

ELISA

ELISA (z angl. Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay), někdy také označovaná jako EIA (Enzyme Immunoassay) je jednou z nejpoužívanějších imunologických metod sloužících k detekci a stanovení koncentrace antigenů nebo protilátek.

More about us

About

Expert Team

Vivamus eget neque lacus. Pellentesque egauris ex.

Award winning agency

Lorem ipsum, dolor sit amet consectetur elitorceat .

10 Year Exp.

Pellen tesque eget, mauris lorem iupsum neque lacus.

You might be interested in

,'protilátka','izotyp','Western blot','Bílkovina','toxin','bakterie','virus','prion','Metr#Násobky a díly','Imunoglobulin A','Imunoglobulin M','Imunoglobulin G'

Bakterie

Bílkovina

Bílkovina je jedním z nejdůležitějších živin v lidské stravě.

Izotyp

Prion

Protilátka

Protilátka je typ proteinu, který se váže na specifický antigen, což je látkový cizí element, aby jej identifikoval a zneškodnil.

Toxin

Virus