Cesko.wiki Coomassie
Author
Albert FloresCoomassie, též známé jako Coomassie Blue, je syntetický barvivo, které se často používá v biochemii a molekulární biologii k barvení bílkovin a dalších makromolekul. Jeho systematický název je 2-[4-(dimethylamino)fenyl]-3,6-dimethylchromen-4-on. Coomassie se používá především pro vykreslení SDS-PAGE gelů, které slouží k oddělení bílkovin podle jejich velikosti a následné vizualizaci. Barvivo je schopné vázat se na bílkoviny, což vytváří modrý až fialový komplex, který je vizuálně detekovatelný. Coomassie je také široce používáno k vyhodnocování koncentrace bílkovin pomocí spektrofotometrie. Jedná se o jedno z nejčastěji používaných barviv na světě díky své jednoduché přípravě a výhodné ceně.
Coomassie Brilliant Blue R-250, vzorec Coomassie (nebo také Brilliant Blue, Brilliant Blue G, Acid Blue 90, C.I. 42655, Brilliant Blue G 250) je modré barvivo, používané převážně při elektroforéze na polyakrylamidovém gelu v přítomnosti dodecylsíranu sodného (tzn. při metodě SDS-PAGE). Gel se v barvivu namáčí třicet minut a potom se přes třicet minut promývá; výsledkem je nosič, který umožňuje dokázat přítomnost bílkovin. Podle polohy barvivem zviditelněných bílkovin na polyakrylamidovém gelu (po elektroforéze) se dá mimo jiné určit molární hmotnost bílkovin v dané oblasti.
Jako u mnoho jiných barviv vzniklo jméno „Coomassie“ z afrického místopisu, v tomto případě z názvu městečka Kumasi v dnešní Ghaně. Sloužilo jako kyselé barvivo k barvení vlny, jméno mělo připomínat britskou okupaci Ašantska v Ghaně v roce 1896.
Předpis pro laboratorní použití
Barvící roztok: 2,5 g Coomassie Brilliant Blue R, 455 ml methanolu, 455 ml deionizované / destilované vody, 90 ml ledové kyseliny octové * Promývací roztok: 455 ml methanolu, 455 ml deionizované / destilované vody, 90 ml ledové kyseliny octové
Bradford
Coomassie je základní složkou pro výrobu Bradfordova činidla (Bradford reagent), používaném při kolorimetrickém stanovení bílkoviny v roztoku, v kyselém prostředí totiž fyzikální adsorpcí tvoří s proteiny (převážně s argininem) stabilní komplex s absorbancí mezi 465 nm a 595 nm; podle Lambertova-Beerova zákona se tedy dá spočítat koncentrace bílkoviny.
Bradfordovo činidlo: 0,01 % Coomassie Brilliant Blue G-250, 4,7 % ethanol, 8,5 % kyselina fosforečná; v deionizované / destilované vodě.
Reference
Externí odkazy
[url=http://www. westernblotting. +moreorg/Coomassie. htm]Ingredience a procedura[/url] * [url=http://www. anaspec. com/search/. searchString1=brilliant+blue&exact=1&searchOption1=7]Zdroj anglické Wikipedie[/url].
Kategorie:Fenolethery Kategorie:Aniliny Kategorie:Benzensulfonáty Kategorie:Sulfonové kyseliny Kategorie:Barvicí metody Kategorie:Elektroforéza Kategorie:Sekundární aminy Kategorie:Terciární aminy