Klonování DNA

PCR Jiné schéma zachycující tento proces klonování Klonování DNA (též molekulární klonování) je laboratorní metoda spočívající v namnožení určitého úseku DNA za pomoci enzymatických systémů živých buněk. Je to několikafázový proces, který zahrnuje tři základní kroky: # příprava rekombinantního vektoru. Není možné použít pouze sekvenci, kterou chceme namnožit. Je třeba totiž zajistit, aby zahrnovala i sekvence důležité pro replikaci, a zamezit, aby došlo k rozložení DNA pomocí nukleáz. Tzv. vektor je DNA, která má tyto vlastnosti a je schopna proniknout do buňky. Jako vektor se používají plazmidy, bakteriofágní DNA, umělé bakteriální chromozomy (BACs) či kosmidy. # přenos takto připravených molekul (vektorů) do buněk. To se dělá různými způsoby, např. biologicky (pomocí adenovirů či retrovirů), případně chemicky (pomocí látek které vyvolají endocytózu dovnitř buňky) či konečně u prokaryotických buněk tzv. fyzikálně (tepelným šokem či elektroporací). Hostitelskou buňkou bývají bakterie (Escherichia coli), kvasinky nebo bakteriofágy. # selekce klonů obsahujících rekombinantní DNA a následně analýza klonované DNA.

Odkazy

Reference

Literatura

Související články

Polymerázová řetězová reakce

Externí odkazy

[url=https://web.archive.org/web/20100505235719/http://biologie.upol.cz/metody/Klonovani%20DNA.htm]Klonování DNA na stránkách Přírodovědné fakulty Univerzity Palackého[/url]

Kategorie:DNA Kategorie:Genetické metody Kategorie:Genové inženýrství Kategorie:Molekulárně biologické metody