Array ( [0] => 15509774 [id] => 15509774 [1] => cswiki [site] => cswiki [2] => SDS-PAGE [uri] => SDS-PAGE [3] => RBC Membrane Proteins SDS-PAGE gel.jpg [img] => RBC Membrane Proteins SDS-PAGE gel.jpg [4] => [day_avg] => [5] => [day_diff] => [6] => [day_last] => [7] => [day_prev_last] => [8] => SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate polyacrylamidová gelová elektroforéza) je biochemická metoda používaná ke separaci a analýze proteinů na základě jejich velikosti molekul. Tato metoda byla poprvé popsána v roce 1964 a těší se širokému využití v biochemickém výzkumu, lékařství a dalších oborech. Princip SDS-PAGE spočívá v použití polyakrylamidového gelu, který slouží jako pórovitá matrice pro oddělení proteinů. Proteiny jsou nejprve denaturovány a přidáním SDS získávají záporný náboj. Následně jsou přivedeny k elektroforéze, kde jsou zavedeny do gelu a pohybují se směrem k anodě, přičemž se oddělují podle své velikosti. Výsledkem je rozpad proteinů do pásem, která odrážejí jejich molekulovou hmotnost. Při SDS-PAGE lze využít různých variant této metody, jako například gradientový gel nebo SDS-PAGE s redukčními podmínkami, které umožňují lépe oddělit proteiny v závislosti na jejich struktuře. SDS-PAGE se široce používá k analýze proteinových vzorků, identifikaci proteinů, stanovení jejich molekulové hmotnosti a kvantifikaci. Dále se využívá při purifikaci proteinů a studiu jejich interakcí s dalšími molekulami. Tato technika je nezbytná pro mnoho vědních a lékařských disciplín, a proto patří mezi významné nástroje v biochemii a molekulární biologii. [oai] => SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate polyacrylamidová gelová elektroforéza) je biochemická metoda používaná ke separaci a analýze proteinů na základě jejich velikosti molekul. Tato metoda byla poprvé popsána v roce 1964 a těší se širokému využití v biochemickém výzkumu, lékařství a dalších oborech. Princip SDS-PAGE spočívá v použití polyakrylamidového gelu, který slouží jako pórovitá matrice pro oddělení proteinů. Proteiny jsou nejprve denaturovány a přidáním SDS získávají záporný náboj. Následně jsou přivedeny k elektroforéze, kde jsou zavedeny do gelu a pohybují se směrem k anodě, přičemž se oddělují podle své velikosti. Výsledkem je rozpad proteinů do pásem, která odrážejí jejich molekulovou hmotnost. Při SDS-PAGE lze využít různých variant této metody, jako například gradientový gel nebo SDS-PAGE s redukčními podmínkami, které umožňují lépe oddělit proteiny v závislosti na jejich struktuře. SDS-PAGE se široce používá k analýze proteinových vzorků, identifikaci proteinů, stanovení jejich molekulové hmotnosti a kvantifikaci. Dále se využívá při purifikaci proteinů a studiu jejich interakcí s dalšími molekulami. Tato technika je nezbytná pro mnoho vědních a lékařských disciplín, a proto patří mezi významné nástroje v biochemii a molekulární biologii. [9] => [is_good] => [10] => [object_type] => [11] => 1 [has_content] => 1 [12] => **SDS-PAGE** SDS-PAGE, což je zkratka pro polyakrylamidovou gelovou elektroforézu v přítomnosti dodecylsulfátového sodného, je fascinující technika široce využívaná v biochemii a molekulární biologii. Tato metoda umožňuje účinně separovat bílkoviny na základě jejich velikosti, což je klíčové pro mnohé aplikace ve výzkumu a diagnostice. Jednou z výhod SDS-PAGE je její schopnost poskytnout cenné informace o struktuře a funkci bílkovin. Dodecylsulfát sodný, přidaný do gelu, denaturuje bílkoviny a zajišťuje, že jejich migrace závisí převážně na jejich molekulové hmotnosti. To umožňuje vědcům přesně odhadnout velikost bílkovin a rozlišovat mezi různými isoformami nebo variantami. Na pozitivní stránce je důležité zmínit, že SDS-PAGE není jen užitečná pro analýzu bílkovin, ale také přispívá k vývoji nových terapeutických přístupů. Tato technika hraje klíčovou roli v mnoha biotechnologických procesech a pomáhá vědcům identifikovat potenciální biomarkery pro řadu onemocnění. Díky její jednoduchosti a efektivitě se stala standardem v laboratořích po celém světě. Na závěr lze říci, že SDS-PAGE je skvělým příkladem toho, jak inovativní metody a techniky mohou přispívat k našemu porozumění komplexnímu světu bílkovin a jejich rolím v biologických procesech. Tímto způsobem podporuje pokrok v oblasti vědy a zdraví, což má pozitivní dopad na společnost jako celek. [oai_cs_optimisticky] => **SDS-PAGE** SDS-PAGE, což je zkratka pro polyakrylamidovou gelovou elektroforézu v přítomnosti dodecylsulfátového sodného, je fascinující technika široce využívaná v biochemii a molekulární biologii. Tato metoda umožňuje účinně separovat bílkoviny na základě jejich velikosti, což je klíčové pro mnohé aplikace ve výzkumu a diagnostice. Jednou z výhod SDS-PAGE je její schopnost poskytnout cenné informace o struktuře a funkci bílkovin. Dodecylsulfát sodný, přidaný do gelu, denaturuje bílkoviny a zajišťuje, že jejich migrace závisí převážně na jejich molekulové hmotnosti. To umožňuje vědcům přesně odhadnout velikost bílkovin a rozlišovat mezi různými isoformami nebo variantami. Na pozitivní stránce je důležité zmínit, že SDS-PAGE není jen užitečná pro analýzu bílkovin, ale také přispívá k vývoji nových terapeutických přístupů. Tato technika hraje klíčovou roli v mnoha biotechnologických procesech a pomáhá vědcům identifikovat potenciální biomarkery pro řadu onemocnění. Díky její jednoduchosti a efektivitě se stala standardem v laboratořích po celém světě. Na závěr lze říci, že SDS-PAGE je skvělým příkladem toho, jak inovativní metody a techniky mohou přispívat k našemu porozumění komplexnímu světu bílkovin a jejich rolím v biologických procesech. Tímto způsobem podporuje pokrok v oblasti vědy a zdraví, což má pozitivní dopad na společnost jako celek. ) Array ( [0] => [[Soubor:SDS-PAGE.jpg|náhled|SDS-PAGE]] [1] => '''SDS-PAGE''' (Někdy SDS-PAAGE) [[elektroforéza]] v [[polyakrylamidový gel|polyakrylamidovém gelu]] v přítomnosti [[dodecylsíran sodný|dodecylsíranu sodného]] (SDS) je [[biochemie|biochemická]] metoda využívaná k separaci proteinů na základě jejich [[elektroforetická pohyblivost|elektroforetické pohyblivosti]], která závisí především na délce polypeptidového řetězce a [[molární hmotnost|molekulární hmotnosti]], ale také na stupni rozbalení ([[denaturace|denaturaci]]) proteinu, [[Posttranslační modifikace|posttranslační modifikaci]] a dalších faktorech. SDS-PAGE se v některých případech používá i k rozdělování velmi malých molekul nukleových kyselin. [2] => [3] => == Postup == [4] => [5] => === Příprava vzorku === [6] => [[Soubor:Disulfide reduction by DTT-2.png|náhled|400px|Princip redukce [[Disulfidický můstek|disulfidických můstků]] pomocí dithiotreitolu]] [7] => [8] => Vzorky proteinů pro analýzu SDS-PAGE mohou pocházet z řady zdrojů. V případě řady bakteriálních buněk nebo [[tkáňová kultura|tkáňových kultur]] je pro přípravu často dostatečné pouhé povaření ve vzorkovém pufru, buňky se silnou buněčnou stěnou ([[kvasinky]], [[rostlinná buňka|rostlinné buňky]]) musí být nejdřív rozrušeny, enzymaticky nebo mechanicky (například [[sonikace|sonikací]]). [9] => [10] => Pro analýzu proteinů metodou SDS-PAGE musí být vzorek denaturován působením [[dodecylsíran sodný|SDS]] a zahřátím. Denaturační podmínky mohou být buď neredukující, při kterých zůstávají zachovány [[disulfidický můstek|disulfidické můstky]], nebo častěji v přítomnosti redukujícího činidla ([[beta-merkaptoethanol]] nebo [[dithiotreitol]]), které dále přispívají k denaturaci proteinů. [11] => [12] => Druhá hlavní funkce SDS ve vzorkovém pufru je obalení proteinu, které je přímo úměrné molekulární hmotnosti proteinu a tak zajišťuje záporný náboj všech proteinů, jejichž náboj může být v přirozených podmínkách různý, v závislosti na jejich [[izoelektrický bod|izolelektrickém bodu]] a okolním [[pH]]. [13] => [14] => Vzorkový pufr pro SDS-PAGE většinou obsahuje: [15] => * [[dodecylsíran sodný]] zajišťující denaturaci proteinu a udělení záporného náboje proteinům [16] => * beta-merkaptoethanol nebo dithiotreitol redukující [[Disulfidický můstek|disulfidické můstky]] proteinů, což dále přispívá k denaturaci proteinů [17] => * [[pufr]] o vhodném pH [18] => * [[glycerol]] zvyšující hustotu vzorku [19] => * [[bromfenolová modř|bromfenolovou modř]], která umožňuje sledovat postup elektroforézy [20] => [21] => === Příprava SDS-PAGE === [22] => Dělení proteinů probíhá v gelu tvořeném [[polyakrylamid]]em (-CH2CHCONH2-), který je sesíťován [[N,N'-methylenbisakrylamid]]em. Koncentrace polyakrylamidu v běžně používaných gelech je 5-50 %, gely s vyšší hustotou se používají pro rozdělování menších proteinů, pro analýzu proteinů o různé velikosti najednou se využívají gely s gradientem koncentrace akrylamidu. Kromě rozdělovacího gelu se připravuje i zaostřovací gel o nižší koncentraci polyakrylamidu a nižším pH, ve kterém dochází k zaostřování vzorku (viz další kapitola). [23] => [24] => Polymerace akrylamidu je katalyzována přítomností [[peroxodisíran amonný|peroxodisíranu amonného]], který dodává volné radikály, a sloučeniny TEMEDu (N,N,N',N'-tetramethylethylendiamin), který polymerizační reakci stabilizuje. [25] => [26] => Složky pro přípravu [[polyakrylamidový gel|polyakrylamidového gelu]]: [27] => * [[akrylamid]], [[N,N'-methylenbisakrylamid]] a [[dodecylsíran sodný]] [28] => * [[tetramethylethylendiamin|TEMED]] [29] => * peroxodisíran amonný [30] => [31] => === Systém pufrů === [32] => [[Soubor:Laemmli System.png|náhled|vpravo| Průběh zaostřování vzorku v [[Ulrich K. Laemmli|Laemmliho]] systému pufrů: A zaostřovací gel, B: rozdělovací gel, o: místo nanesení vzorků c: rozhraní mezi zaostřovacím a rozdělovacím gelem]] [33] => SDS-PAGE využívá diskontinuální systém pufrů, ve kterém se liší pufry pro přípravu gelu a pufr sloužící jako [[elektrolyt]]. Nejrozšířenější je Laemmliho ([[Tris]]-[[glycin]]ový) systém pufrů,{{Citace periodika | příjmení = LAEMMLI | jméno = U. K | titul = Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4 | periodikum = Nature | ročník = 227 | číslo = 5259 | datum = NaN-NaN-NaN | strany = 680–685 | doi = 10.1038/227680a0}} ve kterém jsou použity dva pufry o různém pH pro přípravu zaostřovacího a rozdělovacího gelu a jeden pufr tvořící elektrolyt. [34] => [35] => V zaostřovacím gelu dochází ke koncentraci vzorku do úzkého proužku, což umožňuje nanést větší objem analyzovaného materiálu a zvýšit rozlišovací schopnost metody. Zaostření probíhá na principu [[izotachoforéza|izotachoforézy]], při které dochází k zužování zóny mezi nejrychleji a nejpomaleji se pohybujícím se iontem. V zaostřovacím gelu o pH kolem 6,8 nenese glycin náboj, protože většina molekul je v podobě [[zwitterion]]tů. Glycin se proto v zaostřovacím gelu pohybuje nejpomaleji a tvoří terminující ion. Nejrychleji se pohybujícím iontem jsou chloridové anionty. Proteiny se pohybují pomaleji než chloridové ionty, ale rychleji než glycin, a dochází k jejich zakoncentrování [36] => [37] => Když zóna obsahující proteiny dosáhne rozdělovacího gelu o pH kolem 8, glycin v elektrolytu získá záporný náboj, čímž přestane tvořit terminující ion a proteiny se začnou dělit podle své elektroforetické mobility. [38] => [39] => Kromě Laemmliho systému pufrů se často využívá také tris-[[tricin]]ový systém, ve kterém slouží jako terminující ion tricin. Tento systém se využívá především pro analýzu menších proteinů. [40] => [41] => === Průběh elektroforézy === [42] => Denaturované proteiny jsou laboratorní injekční stříkačkou – [[pipeta|pipetou]] vnesené do jamek [[polyakrylamid|polyakrylamidového gelu]], které jsou vyplněné vhodným [[pufr]]em. Následně je do gelu vpuštěn elektrický proud, díky kterému proteiny záporně nabité pomocí dodecylsíranu sodného migrují skrz gel směrem k [[anoda|anodě]]. Na základě své velikosti se každý protein pohybuje skrz gel s rozdílnou rychlostí; menší proteiny pronikají póry v gelu snadněji než větší, které se střetávají s větším odporem. Po nějakém čase (obvykle několika hodinách, doba probíhání elektroforézy závisí na velikosti proudu, který gelem prochází) jsou proteiny na základě své molekulové hmotnosti rozdělené. Menší proteiny postoupí dále než větší, které jsou blíže počátku, kam byly proteiny aplikovány. [43] => [44] => === Následné kroky analýzy === [45] => Po rozdělení proteinů podle velikosti je možno analyzovat výsledek několika způsoby: [46] => * obarvit všechny proteiny, například pomocí [[Coomassie]] nebo [[Stříbření|stříbra]]. Velikost proteinů se určí porovnáním se sadou známých proteinů sloužících jako standard („marker“). [47] => * vyříznout oblast gelu obsahující protein hledané velikosti a analyzovat pomocí [[hmotnostní spektrometrie]] [48] => * přenést proteiny na membránu vázající proteiny a analyzovat metodou [[Western blot]] [49] => [50] => == Související články == [51] => * [[eastern blot]] [52] => * [[elektroforéza]] [53] => * [[2D elektroforéza]] [54] => * [[Western blot]] [55] => [56] => == Reference == [57] => [58] => [59] => == Literatura == [60] => * Physical biochemistry, David Sheehan, [http://bookos.org/dl/559162/b27f7d Wiley Blackwell(2009)] [61] => {{Autoritní data}} [62] => [63] => [[Kategorie:Elektroforéza]] [64] => [[Kategorie:Biochemické metody]] [65] => [[Kategorie:Imunologické metody]] [] => )
good wiki

SDS-PAGE

**SDS-PAGE** SDS-PAGE, což je zkratka pro polyakrylamidovou gelovou elektroforézu v přítomnosti dodecylsulfátového sodného, je fascinující technika široce využívaná v biochemii a molekulární biologii. Tato metoda umožňuje účinně separovat bílkoviny na základě jejich velikosti, což je klíčové pro mnohé aplikace ve výzkumu a diagnostice.

More about us

About

Tato metoda umožňuje účinně separovat bílkoviny na základě jejich velikosti, což je klíčové pro mnohé aplikace ve výzkumu a diagnostice. Jednou z výhod SDS-PAGE je její schopnost poskytnout cenné informace o struktuře a funkci bílkovin. Dodecylsulfát sodný, přidaný do gelu, denaturuje bílkoviny a zajišťuje, že jejich migrace závisí převážně na jejich molekulové hmotnosti. To umožňuje vědcům přesně odhadnout velikost bílkovin a rozlišovat mezi různými isoformami nebo variantami. Na pozitivní stránce je důležité zmínit, že SDS-PAGE není jen užitečná pro analýzu bílkovin, ale také přispívá k vývoji nových terapeutických přístupů. Tato technika hraje klíčovou roli v mnoha biotechnologických procesech a pomáhá vědcům identifikovat potenciální biomarkery pro řadu onemocnění. Díky její jednoduchosti a efektivitě se stala standardem v laboratořích po celém světě. Na závěr lze říci, že SDS-PAGE je skvělým příkladem toho, jak inovativní metody a techniky mohou přispívat k našemu porozumění komplexnímu světu bílkovin a jejich rolím v biologických procesech. Tímto způsobem podporuje pokrok v oblasti vědy a zdraví, což má pozitivní dopad na společnost jako celek.

Expert Team

Vivamus eget neque lacus. Pellentesque egauris ex.

Award winning agency

Lorem ipsum, dolor sit amet consectetur elitorceat .

10 Year Exp.

Pellen tesque eget, mauris lorem iupsum neque lacus.

You might be interested in

,'dodecylsíran sodný','polyakrylamid','N,N\'-methylenbisakrylamid','Western blot','polyakrylamidový gel','pufr','elektroforéza','denaturace','glycerol','elektroforetická pohyblivost','biochemie','dithiotreitol'

Biochemie

Denaturace

Dithiotreitol

Elektroforéza

Glycerol

Polyakrylamid

Pufr