Cesko.wiki Hovězí sérový albumin
Author
Albert FloresHovězí sérový albumin Hovězí sérový albumin (BSA, bovine serum albumine) je jedním z mnoha albuminů (proteinů krevního séra).
Laboratorní použití
BSA je jedním ze základních proteinů v biochemické laboratoři a nachází uplatnění v mnoha experimentech. Nejčastější použití: * referenční (modelový) protein se kterým se srovnávají vlastnosti jiných proteinů * marker molekulových hmotností (SDS-elektroforesa, nativní elektroforesy, gelová chromatografie) * blokátor volných vazebných míst (ELISA, ELBA, western blotting) * proteinová součást různých médii pro práci s buňkami * nosič haptenů při imunizaci a při imunoesejích
Vlastnosti BSA
Řetězec obsahuje 583 aminokyselin, které jsou větveny do dvou řetězců.
Fyzikální vlastnosti BSA: * Počet aminokyselinových zbytků: 583 * Molekulární váha: 66 463 Da (= 66,5 kDa) * izoelektrický bod ve vodě při 25 °C: 4. 7 * Extinkční koeficient 43,824 M−1cm−1 při 279 nm * Velikost: 140 × 40 × 40 Å (protáhlý elipsoid, kde a = b 259: -61°; [α]264: -63° * Stokesův poloměr (rs): 3. +more48 nm * Sedimentační konstanta, S20,W × 1013: 4. 5 (monomer), 6. 7 (dimer) * Difuzní konstanta, D20,W × 10−7 cm2/s: 5. 9 * Částečný specifický objem, V20: 0. 733 * Vnitřní viskozita, η: 0. 0413 * Frikční koeficient, f/f0: 1. 30 * Přírůstek indexu lomu (578 nm) × 10−3: 1. 90 * Optická absorbance, A279 nm1 g/L: 0. 667.
Izolace BSA
Vzorek hovězího sérového albuminu (BSA) BSA tvoří asi 50 % všech proteinů séra skotu. +more Izoluje se tzv. Cohnovým procesem (extrakcí), která využívá rozdílné rozpustnosti BSA a jiných sérových proteinů v prostředích o různém pH, koncentraci ethanolu, iontové síle a teplotě. Víceméně čistý BSA (s příměsí imunoglobulinů) se označuje také jako V. Cohnova frakce. Pokud je zapotřebí ještě větší čistoty, je nutné tuto frakci podrobit dalšímu přečištění (např. chromatografii na Blue-Sepharose). Za nativních podmínek se vyskytuje jako směs monomeru a dimeru.
Biologická funkce BSA
Díky hydrofobní kapse na svém povrchu slouží v krvi jako nosič hydrofobních látek, které by měly jinak příliš nízkou rozpustnost (např. steroidní hormony) podobně jako jiné analogické sérové albuminy (např. +more lidský sérový albumin - HSA, prasečí sérový albumin - PSA). Díky vysoké koncentraci BSA v krvi se významně uplatňuje i jako pufrační činidlo a napomáhá tak udržovat stabilní pH krve.